用光谱法测定锌对核激素受体dna结合域的结合亲和力。
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Payne JC, Rous BW, Tenderholt AL, Godwin HA
用光谱法测定锌对核激素受体dna结合域的结合亲和力。
生物化学。2003 12月9日;42(48):14214-24。
- PubMed ID
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14640689 (PubMed视图]
- 摘要
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锌与核激素受体蛋白dna结合结构域(DBD)中存在的两个Cys(4)位点的结合对于结构域的正确折叠和蛋白质活性是必需的。利用Co(2+)作为光谱探针，我们在人雌激素受体(hERalpha-DBD)和大鼠糖皮质激素受体(GR-DBD)的DBD中发现了两个Cys(4)结构锌结合位点的金属结合特性。Co(2+)对这两种蛋白质的结合亲和力是根据Co(2+)对锌指一致肽CP-1的结合亲和力来确定的。利用已知的Co(2+)从CP-1的解离常数，计算出钴从hERalpha-DBD的解离常数:K(d1)(Co) = 2.2 (+/- 1.0) × 10(-7) M和K(d2)(Co) = 6.1 (+/- 1.5) × 10(-7) M。同样，计算出Co(2+)从GR-DBD的解离常数:K(d1)(Co) = 4.1 (+/- 0.6) × 10(-7) M和K(d2)(Co) = 1.7 (+/- 0.3) × 10(-7) M。在进行的金属结合研究中，Zn(2+)将Co(2+)从hERalpha-DBD和GR-DBD的金属结合位点上取代，表明Zn(2+)与每个Cys(4)金属结合位点的结合比Co(2+)紧密约3个数量级:herα - dbd的化学量解离常数为K(d1)(Zn) = 1 (+/- 1) × 10(-10) M, K(d2)(Zn) = 5 (+/- 1) × 10(-10) M, GR-DBD的化学量解离常数为K(d1)(Zn) = 2 (+/- 1) × 10(-10) M, K(d2)(Zn) = 3 (+/- 1) × 10(-10) M。这些亲和性与大多数其他自然发生的结构锌结合位点的亲和性相当。与Low等人最近的预测相反，锌在这些体系中的结合应该是合作的[Low, L. Y.， Hernandez, H.， Robinson, C. V.， O'Brien, R.， Grossmann, J. G.， Ladbury, J. E.和Luisi, B. (2002) J. Mol. Biol. 319, 87-106]，这些数据表明，在hERalpha-DBD和GR-DBD的dbd的两个位点上结合的锌不相互作用。