核苷二磷酸激酶从非洲爪蟾蜍卵母细胞;部分纯化和表征。
文章的细节
-
引用
复制到剪贴板 -
Buczynski G,波特RL
核苷二磷酸激酶从非洲爪蟾蜍卵母细胞;部分纯化和表征。
Biochim Biophys学报。1990年12月5日,1041 (3):296 - 304。0167 - 4838 . doi: 10.1016 / (90) 90288 - q。
- PubMed ID
-
2176546 (在PubMed]
- 文摘
-
我们已经确定了部分纯化可溶性核苷二磷酸激酶(NDP激酶)从非洲爪蟾蜍光滑的卵母细胞。酶制剂可以促进ATP的磷酸转移到所有主要的氧和deoxynucleotides。它还可以促进从gamma-S-ATP phosphorothioate集团的转移到受体形成gamma-S-GTP GDP。像民主党激酶从其他来源、催化机制似乎涉及phosphoenzyme中间可以孤立。从核苷三磷酸腺苷磷酸蛋白转移迅速,1分钟内达到饱和后的核苷三磷酸腺苷。从磷蛋白质中间磷酸核苷二磷酸的转移也同样快。虽然核苷二磷酸激酶通常认为需要镁活动,卵母细胞酶制剂和商业牛肝酶制剂只有部分被短(10分钟)曝光25毫米EDTA。然而,酶制剂都进一步抑制长孵化项目这种金属螯合剂(2 h, 70%抑制)。EDTA锌提高了民主党激酶的抑制,但自己是无效的。快速磷酸化的存在[gamma-32P] ATP和EDTA可以用来识别phosphoenzyme中间的匀浆非洲爪蟾蜍卵母细胞并促进其孤立。 Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis coupled with autoradiography indicated the presence of only a single phosphorylated species of Mr 21,500 in supernatants of fresh oocyte homogenates. Partial purification of this protein utilizing salt precipitation, hydrophobic-interaction chromatography and an affinity step with Affi-Gel Blue Sepharose resulted in a 100-fold purification and a 29% overall yield of NDP-kinase activity. Size-exclusion chromatography of the purified preparation yielded two peaks containing enzyme activity. They eluted with apparent molecular weights of 45,000 and 70,000, suggesting a native enzyme that is multimeric or associated with other proteins.