表达和纯化的重组形式的人类芳香化酶大肠杆菌。

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张F,周D,花王YC, J,陈

表达和纯化的重组形式的人类芳香化酶大肠杆菌。

生物化学杂志。2002年11月1日,64 (9):1317 - 24。

PubMed ID

12392814 (在PubMed

]

文摘

芳香化酶雄激素转化为雌激素,一种激素,在乳腺癌的发展中起着重要的作用。芳香化酶抑制剂已被证明是一个有用的estrogen-dependent乳腺癌的内分泌治疗方案。结构的研究芳香化酶可以生成关键设计高度有效的和特定抑制剂的结构信息。然而,芳香化酶结构的研究一直受到纯化蛋白的缺乏。在这个报告中,我们描述了建设和表达的重组人芳香化酶在大肠杆菌中使用导数的宠物载体系统,和酶的纯化通过nickel-agarose亲和色谱法。我们检查了全身的表达,Del-38 C-6xHis-tagged Del-38,和NC-6xHis-tagged Del-38形式的芳香。没有第一的芳香化酶重组38氨基酸从氨基酸(例如Del-38)被发现比完整的酶活性更高。此外,新增的两个独立hexameric组氨酸标记氨基酸和carboxyl-termini(即NC-6xHis-tagged Del-38)增加了nickel-agarose重组酶的亲和力。芳香化酶表达(例如NC-6xHis-tagged Del-38芳香化酶)从nickel-agarose筛选了80毫米EDTA。总芳香化酶活动的80毫米EDTA-eluted分数明显高于detergent-solubilized蛋白质提取,表明在nickel-agarose亲和色谱复性过程。 Purified aromatase exhibited a single band when analyzed by SDS-PAGE, and activity up to 5.8 nmol/mg/min was obtained using the tritiated water release assay. The K(m) value for androstenedione was determined to be 62+/-24 nM by enzyme kinetic analysis. The recombinant aromatase preparation was also characterized by reduced CO-difference spectral analysis, reaction product extraction assay, and inhibition studies using two aromatase inhibitors (letrozole and anastrozole). The results indicate that the recombinant aromatase from E. coli has catalytic properties identical to those of the enzyme expressed in human tissue and will be very useful for further structure-function studies of aromatase.

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药物酶

药物	酶	类	生物	药理作用	行动
Edetate钙二钠无水	细胞色素P450 19 a1	蛋白质	人类	未知的	调制器	细节
Edetate二钠无水	细胞色素P450 19 a1	蛋白质	人类	未知的	调制器	细节
依他酸	细胞色素P450 19 a1	蛋白质	人类	未知的	底物	细节