L-phenylalanine绑定和域组织在人类苯丙氨酸羟化酶:差示扫描量热法研究。

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Thorolfsson M, Ibarra-Molero B, Fojan P,彼得森某人,Sanchez-Ruiz JM,马丁内斯

L-phenylalanine绑定和域组织在人类苯丙氨酸羟化酶:差示扫描量热法研究。

生物化学。2002年6月18日,41 (24):7573 - 85。

PubMed ID

12056888 (在PubMed

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人类的苯丙氨酸羟化酶(hPAH)是一个四聚物的酶催化羟基化的L-phenylalanine酪氨酸(L-Phe);这种酶的功能障碍导致苯丙酮酸尿。hPAH中的每个单元包含一个氨基端监管域(Ser2-Ser110)催化域(Asp112-Arg410),和一个寡聚化域(Ser411-Lys452)包括二聚和tetramerization图案。两个部分重叠的转换在差示扫描量热法(DSC)对野生型hPAH温谱图0.1 M Na-Hepes缓冲区,0.1 M氯化钠,pH值7.0。虽然这些转换是不可逆转的,研究他们的扫描速率依赖支持热力学平衡分析在这种情况下是允许的。比较的DSC热分析图截短形式的酶,研究蛋白质和L-Phe浓度对转换的影响,和structure-energetic计算基于建模结构支持的热变性hPAH发生在三个阶段:(i)展开的四个管理域,负责低温热量转变;(2)的两个(四)催化领域,负责高温过渡;和(3)不可逆的蛋白质变性,这可能是负责观察在高温的高温放热失真过渡。阶段1和2不似乎是两国并存的过程。我们提出一个方法来分析配体对DSC转变温度的影响,基于通用绑定多项式形式主义和不限于两国转换。 Application of this approach to the L-Phe effect on the DSC thermograms for hPAH suggests that (i) there are no binding sites for L-Phe in the regulatory domains; therefore, contrary to the common belief, the activation of PAH by L-Phe seems to be the result of its homotropic cooperative binding to the active sites. (ii) The regulatory domain appears to be involved in cooperativity through its interactions with the catalytic and oligomerization domains; thus, upon regulatory domain unfolding, the cooperativity in the binding of L-Phe to the catalytic domains seems to be lost and the value of the L-Phe concentration corresponding to half-saturation is increased. Overall, our results contribute to the understanding of the conformational stability and the substrate-induced cooperative activation of this important enzyme.

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药物靶点

药物	目标	类	生物	药理作用	行动
苯丙氨酸	Phenylalanine-4-hydroxylase	蛋白质	人类	未知的	不可用	细节