质谱鉴定磷酸化网站guanylyl环化酶A和B。
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尤德AR、石头MD,格里芬TJ·波特LR
质谱鉴定磷酸化网站guanylyl环化酶A和B。
生物化学。2010年11月30日,49 (47):10137 - 45。doi: 10.1021 / bi101700e。Epub 2010年11月8日。
- PubMed ID
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20977274 (在PubMed]
- 文摘
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Guanylyl环化酶A和B (GC-A和GC-B)是跨膜Guanylyl酸环化酶受体调节钠尿肽的生理效应。一些网站的磷酸化以鼠GC-A GC-B,但没有磷酸化网站信息可供人类同系物。在这里,我们用质谱鉴定磷酸化网站GC-A和GC-B两物种。从HEK293细胞纯化胰蛋白酶的消化的受体被nLC-MS-MS分离和分析。七个网站确定磷酸化的老鼠GC-A (S497, T500 S502, S506,产品线S510, T513,和S487),和所有这些网站除了产品线S510和T513人类GC-A观察。六个磷酸化网站中确定鼠GC-B (S513、T516 S518, S523, S526,和T529),和所有人类GC-B亦发现了6个地点。五个网站是相同的GC-A和GC-B之间。S487 GC-A和T529 GC-B是小说,但一个个网站。替换的丙氨酸S487并不影响初始ligand-dependent GC-A活动,但谷氨酸替换活动减少20%。类似水平的ANP-dependent脱敏观察野生型,S487A, S487E GC-A形式。 Substitution of glutamate or alanine for T529 increased or decreased ligand-dependent cyclase activity of GC-B, respectively, and T529E increased cyclase activity in a GC-B mutant containing glutamates for all five previously identified sites as well. In conclusion, we identified and characterized new phosphorylation sites in GC-A and GC-B and provide the first evidence of phosphorylation sites within human guanylyl cyclases.