Cys319结构变异和acetohydroxamate-inhibited克雷伯氏菌aerogenes脲酶。
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皮尔森马,米歇尔•罗Hausinger RP, Karplus PA
Cys319结构变异和acetohydroxamate-inhibited克雷伯氏菌aerogenes脲酶。
生物化学。1997年7月1;36 (26):8164 - 72。
- PubMed ID
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9201965 (在PubMed]
- 文摘
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Cys319位于移动皮瓣覆盖克雷伯氏菌的活性部位aerogenes脲酶但不催化中起着关键作用。四脲酶变异改变位置C319范围从高活动(C319A)没有可衡量的活动(C319Y),表明半胱氨酸在这个位置不是必需的,但它的存在是具有重要影响[马丁,p R。& Hausinger r p(1992)生物。化学,267,20024 - 20027]。在这里,我们目前的2.0 C319A分辨率晶体结构,C319S, C319D, C319Y蛋白质和C319A变种被acetohydroxamic酸。这些结构显示变化的水化活性部位中的镍离子和活性位点的位置和灵活性。C319Y蛋白表现出另一种皮瓣的构象,解释其缺乏活动。水化和构象的变化表明,空有理想protein-solvent和蛋白质相互作用对脲酶催化的脲酶活性部位。具体来说,我们假设的理想交互可能提供的一个重要来源基质结合能,和这样的隐藏的能量可能是一种普遍现象包含移动活性位点的酶循环并接受一个诱导契合。的acetohydroxamic acid-bound结构揭示了螯合物相互作用类似看到其他近年在小分子镍复杂。尿素的抑制剂绑定模式支持该模式绑定。 We complement these structural studies with extended functional studies of C319A urease to show that it has enhanced stability and resistance to inhibition by buffers containing nickel ions. The near wild-type activity and enhanced stability of the C319A variant make it useful for further studies of urease structure-function relationships.