分析人类的细胞色素P450 2 c8底物特异性使用衬底药效基因和基因定点突变体。

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Melet, Marques-Soares C, Schoch GA, Macherey AC, Jaouen M, Dansette点,纱丽,约翰逊EF,怎么D

分析人类的细胞色素P450 2 c8底物特异性使用衬底药效基因和基因定点突变体。

生物化学,2004年12月14日,43 (49):15379 - 92。doi: 10.1021 / bi0489309。

PubMed ID

15581350 (在PubMed

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文摘

底物特异性的结构因素的人类肝细胞色素P450 2 c8 (CYP2C8)研究了使用基因定点突变体选择的基础上初步衬底药效团和三维(3 d)模型。结构特点的分析常见CYP2C8基质展示微摩尔的K (m)导致的氧化底物的药效团网站CYP2C8是12.9,8.6,4.4,和3.9特性,可以建立离子或氢键,疏水相互作用和蛋白质的氨基酸残基。比较的药效团的3 d模型CYP2C8建造使用的x射线结构CYP2C5建议潜在CYP2C8氨基酸残基,可以参与底物识别。二十CYP2C8基因定点突变体构造,用酵母表达比较他们的催化活动使用五CYP2C8基质表现出不同的结构和大小(视黄酸,紫杉醇,fluvastatin sulfaphenazole导数(DMZ)和双氯芬酸)。241年精氨酸突变有显著影响阴离子基质的羟基化CYP2C8视黄酸和fluvastatin等。丝氨酸100似乎参与氢键相互作用一个极性CYP2C8衬底的药效团,如图所示的3-4-fold增加紫杉醇的K (m)和DMZ羟基化后S100A突变。残留114、201和205年预计在密切接触基板,及其突变导致良好的疏水相互作用或空间与底物发生冲突。例如,S114F突变无法催化6 alpha-hydroxylation紫杉醇。S114F和F205A突变体视黄酸的最佳催化剂和紫杉醇(或fluvastatin)羟基化,分别与k (cat) / k (m)值5和2.1(或2.4)倍,分别为CYP2C8比。对接的衬底的初步实验的实验确定x射线结构substrate-free CYP2C8,成为可用最近[Schoch, g。,et al。(2004)生物。 Chem. 279, 9497], were consistent with key roles for S100, S114, and F205 residues in substrate binding. The results suggest that the effects of mutation of arginine 241 on anionic substrate hydroxylation could be indirect and result from alterations of the packing of helix G with helix B'.

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