局部净化和调整人类的多药耐药性泵:drug-stimulatable ATP水解的表征。
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张Lelong IH Ambudkar SV, J, Cardarelli有限公司戈特斯曼MM, Pastan我
局部净化和调整人类的多药耐药性泵:drug-stimulatable ATP水解的表征。
《美国国家科学院刊S a . 1992年9月15日;89 (18):8472 - 6。
- PubMed ID
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1356264 (在PubMed]
- 文摘
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耐多药人类肿瘤细胞凋亡基因过表达产品22,据信功能作为ATP-dependent射流泵。在这项研究中我们证明部分纯化22,在人造膜重组时,催化drug-stimulated ATP水解。等离子体膜蛋白的人类耐多药细胞株,KB-V1,可溶性与1.4% (wt /卷)辛基beta-D-glucopyranoside的0.4%(卷/期)甘油磷脂和20%,原油和洗涤剂提取色谱仪在DEAE-Sepharose CL-6B。0.1 M氯化钠分数,富含22但缺乏Na, K-ATPase,被detergent-dilution重组方法。22构成proteoliposomes重组蛋白质的25 - 30%。proteoliposomes ATP水解的刺激增加3.5倍的长春花碱,但疏水抗肿瘤剂喜树碱的影响,而不是经由22。长春花碱的刺激效果观察只有蛋白质在proteoliposomes重组,要么表明底物结合位点(s)掩盖了洗涤剂或可溶性蛋白的构象22可能不适合substrate-induced激活。几个已知的其他药物经由22提高腺苷三磷酸酶活性剂量依赖性的方式相对效能如下:阿霉素=长春花碱大于道诺霉素大于放线菌素D大于异搏定大于秋水仙碱。钒酸基底和vinblastine-stimulated atp酶的活动受到抑制(50%抑制观察到7 - 10 microM)但不影响代理,抑制其他atp酶和磷酸酶。这些数据表明,22,类似于其他ion-transporting ATP酶,展示高水平的ATP水解(5 - 12 mumol每分钟每毫克的蛋白质)。