克雷伯氏菌噬菌体K11溶菌酶基因的克隆和表达。
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Suh KH Junn HJ,只要J,李党卫军
克雷伯氏菌噬菌体K11溶菌酶基因的克隆和表达。
蛋白质Expr Purif。2005年7月,42 (1):78 - 84。Epub 2005年4月19日。
- PubMed ID
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15882950 (在PubMed]
- 文摘
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之前,克雷伯氏菌的溶菌酶基因噬菌体K11在我们实验室部分测序。使用的溶菌酶基因序列信息克雷伯氏菌噬菌体K11放大和克隆利用pfu DNA聚合酶的聚合酶链反应。噬菌体K11溶菌酶基因的核苷酸序列。开放阅读框对应一个和151个氨基酸多肽分子量16932哒。推导的氨基酸序列的多肽显示74 - 75%同源T7和T3噬菌体溶菌酶。尽管基因高效表达tac启动子的控制下在大肠杆菌细胞XL1-blue 37摄氏度,大部分的K11溶菌酶产生不溶性。细胞生长的温度降低时,然而,K11溶菌酶的溶度逐渐增加。在37摄氏度是可溶性表达的不溶性蛋白质在5 M guanidine-HCl和复合oxido-shuffling代理(谷胱甘肽(GSSG)。通过重折叠过程可溶性和纯化重组溶菌酶。纯化K11溶菌酶显示转录抑制K11 RNA聚合酶以及酰胺酶的活动。这些结果表明,溶菌酶的噬菌体K11削减债券是一种双功能蛋白的细菌细胞壁和选择性地抑制K11噬菌体RNA聚合酶。 Also, transcription inhibition ability of K11 lysozyme with T7 or SP6 phage RNA polymerase was measured. T7 RNA polymerase was less inhibited than K11 RNA polymerase by K11 lysozyme. But SP6 RNA polymerase was not nearly inhibited by K11 lysozyme.