位点定向突变对人三酰甘油水解酶的结构-功能分析:催化三联体和糖基化位点的鉴定。
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阿拉姆M，万斯DE，雷纳R
位点定向突变对人三酰甘油水解酶的结构-功能分析:催化三联体和糖基化位点的鉴定。
生物化学。2002 5月28日;41(21):6679-87。
- PubMed ID
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12022871 (查看PubMed］
- 摘要
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三酰基甘油水解酶是一种微粒体酶，可水解肝脏中储存的细胞质三酰基甘油，并参与极低密度脂蛋白组装过程中的脂解/再酯化循环。通过定点突变和异源表达研究该酶的构效关系。人TGH在大肠杆菌中的表达产生了一种没有酶活性的蛋白质，这表明翻译后处理对催化活性是必要的。在杆状病毒感染的Sf-9细胞中表达导致了n端信号序列的正确处理，并产生了催化活性酶。确定了一个由亲核丝氨酸(S221)、谷氨酸(E354)和组氨酸(H468)组成的三元催化基团。位点定向突变的残基(S221A, E354A，和H468A)产生催化活性酶。纯化的突变蛋白的CD光谱与野生型酶的CD光谱非常相似，这表明突变不影响折叠。人TGH在昆虫细胞中糖基化。对假定的n -糖基化位点(N79A)进行突变，产生一个活性的非糖基化酶。假设的c端内质网检索信号(HIEL)的缺失并没有导致突变蛋白的分泌。 A model of human TGH structure suggested a lipase alpha/beta hydrolase fold with a buried active site and two disulfide bridges (C87-C116 and C274-C285).