人三酰基甘油水解酶的异源表达、纯化和鉴定。
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何珊珊，李文华，李文华
人三酰基甘油水解酶的异源表达、纯化和鉴定。
Protein Expr Purif. 2002 Feb;24(1):33-42。
- PubMed ID
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11812220 (在PubMed］
- 摘要
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三酰甘油水解酶将储存的三酰甘油活化，其中一些用于肝脏中极低密度脂蛋白的组装。从人肝脏cDNA文库中分离到人三酰基甘油水解酶(hTGH)的全长cDNA。该cDNA具有576个氨基酸的开放阅读框，其中含有可裂解的18个氨基酸信号序列。推导的氨基酸序列表明该蛋白属于羧酸酯酶家族。hTGH在大肠杆菌中以6xhis标记的融合蛋白的形式高表达，其标记位于n端，而不是信号肽。然而，表达的蛋白是不溶性和非活性的。经免疫印迹法和n端氨基酸测序证实表达。利用杆状病毒表达系统在Sf9细胞中表达hTGH及其固有信号序列和c端6xHis-tag产生活性酶。纯化表达蛋白的n端氨基酸序列显示信号肽的正确处理。酶也在内质网腔内进行糖基化。 The results suggest that hTGH expressed in insect cells is properly folded. Therefore, baculovirus expression of hTGH and facile purification of the His-tagged enzyme will allow detailed characterization of the structure/activity relationship.