人单核/巨噬细胞中的胆固醇酯水解酶:全长cDNA的克隆、测序和表达。
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Ghosh年代
人单核/巨噬细胞中的胆固醇酯水解酶:全长cDNA的克隆、测序和表达。
物理基因组学。2000年1月24日;2(1):1-8。
- PubMed ID
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11015575 (在PubMed］
- 摘要
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采用RT-PCR技术对人巨噬细胞中表达的胆固醇酯水解酶(CEH)进行了检测。这种酶被认为调节细胞内游离胆固醇的可用性。从人类外周血和THP-1单核细胞和巨噬细胞的RNA开始，获得预期的667 bp产物。通过pcr筛选lambda-gt11 cDNA文库，克隆出人巨噬细胞CEH的cDNA。对全长cDNA进行测序，发现其与肝CEH具有76%的同源性(在核苷酸和概念性翻译蛋白水平上)。CEH是一种酶，参与肝胆固醇稳态，并在转录水平上通过近端启动子中的甾醇响应元件受到胆固醇的调节。保守催化三元(Ser(221， His(468)和Glu354))和SEDCLY motif将人巨噬细胞CEH置于羧酸酯酶家族中。当COS-1和COS-7细胞瞬时转染含有人巨噬细胞CEH cDNA的真核表达载体pcDNA3.1/V5/His-TOPO时，可以观察到CEH活性增加20倍以上。利用该全长cDNA作为探针，通过对人外周血和THP -1巨噬细胞总RNA的Northern blot分析，鉴定出2.2 kb的转录本。人巨噬细胞CEH过表达导致中国仓鼠卵巢(CHO-K1)细胞低密度脂蛋白(LDL)受体mRNA上调的损伤。这些数据确定了人巨噬细胞CEH，证明了其在人外周血巨噬细胞和人巨噬细胞细胞系THP-1中的表达，并提示其在细胞内胆固醇酯代谢中的作用。