Glycosylation-dependent baculovirus-expressed人类肝脏羧酸酯酶活性:cDNA克隆和表征两个高度相似的酶的形式。
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Kroetz DL,麦克布莱德噢,冈萨雷斯陆地
Glycosylation-dependent baculovirus-expressed人类肝脏羧酸酯酶活性:cDNA克隆和表征两个高度相似的酶的形式。
生物化学。1993年11月2日,32(43):11606 - 17所示。
- PubMed ID
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8218228 (在PubMed]
- 文摘
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指定hCE cDNA,编码整个序列的羧酸酯酶,从人类的肝脏孤立λgt11图书馆。hCE-deduced蛋白质序列含有568个氨基酸,包括18种氨基酸的信号肽序列,并计算60609 Da的成熟蛋白的分子质量。第二个cDNA、指定hCEv,隔绝相同λgt11图书馆和包含一个3-bp缺失导致的损失最终信号肽的氨基酸序列(Ala-1)和第二个3-bp删除导致在坐标系Gln345的损失。mRNA的表达相应hCE和hCEv中检测出8个成人肝脏样本,与个别水平不同的5倍(hCE), 12 (hCEv)。一个免疫反应性的蛋白质13成人肝脏样本中,检测出当探测与抗体针对老鼠羧酸酯酶。基于allele-specific寡核苷酸杂交过程,我们相信hCE和hCEv互补代表两种截然不同的羧酸酯酶家族的成员。羧酸酯酶基因被本地化的人类染色体16使用体细胞杂种的映射策略。杆状病毒表达hCE Sf9细胞产生一种蛋白质,估计59000 Da的分子质量。这种酶能够水解芳香族和脂肪族酯类,但不具有催化活性对酰胺或脂酰辅酶a酯。Baculovirus-mediated hCEv cDNA表达产生了第二个蛋白质56000 Da造成低效N-glycosylation hCEv蛋白质。 Although the substrate specificity for the hCEv protein was identical to that of expressed hCE for any given substrate, the specific activity for the hCE protein was always higher than that for the hCEv protein. Tunicamycin inhibition studies provided the first evidence that N-glycosylation of these luminal enzymes is essential for maximal catalytic activity.