人全反式视黄酸受体β及其配体结合域在大肠杆菌中的表达。
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郭志强，张志强，张志强
人全反式视黄酸受体β及其配体结合域在大肠杆菌中的表达。
生物化学杂志1995年5月15日;308 (Pt 1):353-9。
- PubMed ID
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7755585 (在PubMed］
- 摘要
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全反式维甲酸是维生素A的激素活性衍生物之一，在血浆中的生理作用浓度低于10纳摩尔/升。目前用于定量的方法都是基于高效液相色谱法(HPLC)，需要约1ml的血清，相对费力，因此不太适合大规模分析。视黄酸受体对全反式视黄酸的亲和力和特异性促使我们在大肠杆菌中表达整个人类视黄酸受体β (rar - β)及其两个版本的视黄酸结合域，希望这些重组蛋白可以用作全反式视黄酸配体结合试验中的结合剂。重组受体[rar - β -(V7-Q448)]对应于A-F结构域，配体结合结构域[rar - β -(E149-Q448)]对应于D-F结构域，以包合体形式表达于载体pET 3d/BL21 (DE3)中，氯化胍溶解，离子交换层析纯化。RAR-beta-(P193-Q448)在载体pET 3d/BL21(DE3)pLysS中表达，与E-F结构域相对应，用反相色谱法纯化。在非变性条件下，表达的整个受体[rar - -(V7-Q448)]和D-F结构(rar - -(E149-Q448)]在色谱上表现为单体蛋白，而E-F结构[rar - -(P193-Q448)]有很强的聚集倾向。rar - β -(V7-Q448)和rar - β -(E149-Q448)对全反式维甲酸的Kd值相近(分别为1.4和0.6 nmol/l)，而rar - β -(P193-Q448)结合的全反式维甲酸的Kd值较低(Kd为9.6 nmol/l)。9-顺式视黄酸与rar - β -(E149-Q448)和rar - β -(V7-Q448)结合的速度与全反式视黄酸一样快。竞争实验显示，rar - β -(E149-Q448)对4-氧-全反式维甲酸、4-氧-13-顺式维甲酸、13-顺式维甲酸、阿维黄素和视黄醇的结合弱或不结合。